细胞技术论文篇1

3、制片方法

3.1传统涂片方法:纤维支气管镜刷头直接涂抹于载玻片上，涂片1张，干燥，95%乙醇固定10min，常规HE染色镜检。

3.2BDTriPath制片方法:标本加入专用50ml离心管中，使用程控离心机以Hettich3#程序600r/min离心10min，迅速管架倒置180°倾出上清液，加入CyteRichRed固定液20ml，静置30min，Hettich的3#程序以600r/min离心10min，迅速管架倒置180°倾出上清液，涡漩混合器振荡均匀，加入10mlTris缓冲液，混均，移至12ml的离心管，Hettich的4#程序以600r/min离心5min，迅速管架倒置180°倾出上清液，涡漩混合器振荡(15±5)s。管架放在PrePStain系统上，静置10min，等待上机自动制片染色。

4、判断标准:涂片诊断采用正常、可疑癌细胞、癌细胞三种分类方法，后两项为阳性标本。尽量由同一位医师操作电子支气管镜采集标本，由两位细胞病理学医师同时阅片镜检，以找到癌细胞为阳性。

5、统计学方法:统计学处理数据采用SPSS10．0软件包进行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

两种涂片质量比较:传统涂片，涂片范围大小不一，涂片背景红细胞白细胞多，细胞分布厚薄不均，胞质核浆结构对比不明显，胞核染色质均一模糊、核仁不清;支气管镜刷检细胞标本LCT制片后，细胞集中于涂片范围直径15mm专用玻片上，细胞界限清楚，涂片背景干净清晰，细胞分布单个散在或成团分布，有立体感，胞质着色鲜艳、易于观察，胞核核膜分明，核内染色质及核仁清晰可见。薄层液基细胞学涂片诊断肺癌阳性率为58．33%，(146/252)，其中中央型肺癌98例，周围型肺癌48例。传统涂片诊断肺癌的阳率为33．19%，(84/252)，其中中央型肺癌68例，周围型肺癌16例。液基薄层细胞学与传统涂片的阳性率的差异有统计学意义P＜0．05。

三、讨论

支气管镜刷检细胞学标本应用传统涂片方法制片，受细胞新鲜程度、细胞量、出血及炎性背景、制片技术等因素影响，造成背景不清晰、涂片细胞易重叠、厚薄不均、细胞形态不易观察、有意义细胞数量偏少，容易出现假阴性或假阳性结果，漏诊重要病变。液基薄层细胞学制片技术(LCT)是近年来出现一种制片技术的革新，明显优于传统巴氏涂片的检查方法，其中有代表性的是BDThiPth离心沉降技术和新柏氏(ThiPthTCT)模式技术。两种方法工作原理不同，分别为重力沉降式和过滤膜式，已经广泛成熟应用于宫颈细胞学检查和TBS诊断报告，对比传统巴氏涂片，宫颈癌及癌前病变(低度鳞状上皮内病变和高度鳞状上皮内病变)检出率大大提高，标本采集及制片质量的优越性是传统涂片技术无法比拟的，特别是BDThiPth制片技术在细胞数量、背景去除非诊断性杂质、全自动制片染色及诊断质量尤为突出。美国FDA认证:超柏式液基薄层细胞学检查是所有液基细胞学技术中检出率最高的技术。2005年美国病理协会非妇科细胞学实验室比较液基制片方法与传统制片方法在体液样本检测能力，证实液基制片方法更容易检出肿瘤。

对比传统涂片，LCT制片使细胞在载玻片上分布均匀，厚薄一致，细胞数量多，集中于15mm范围内易于阅片，核染色质着色鲜明，核浆对比效果好，易于观察核结构，染色背景清晰，制片质量十分满意，阳性率显著提高。LCT制片技术和诊断质量体会:支气管镜刷检由于全部收集或大部分收集送检标本，最大程度保留病变细胞，尤为适用LCT制片方法;液基涂片中的细胞核可能不如传统涂片中那样深染，但细胞核异型性是判读恶性或可疑恶性病变的重要重要标准，一般认为核占优势、核浆比例高、核膜不规则、染色质凝块状、核仁清或多个小核仁为恶性证据;巴氏染色胞浆在区分腺癌或分化鳞癌很有帮助，前者胞浆见空泡，后者胞浆橘黄色、含角蛋白;仔细观察成团核深染的细胞，如怀疑异常，在背景中全面寻找单个异型细胞更有意义;提高制片质量显著，但诊断阳性率的改善还需病理诊断医师勤于积累，LCT在支气管镜刷检细胞标本应用时间及应用范围还比较晚，对同一份标本同时进行普通涂片，以积累经验，减少误诊。

支气管镜检查是目前诊断肺癌的常规检查方法，刷检联合组织活检的重要手段。传统支气管镜黏膜细胞学检查是在支气管镜检查过程中用支气管毛刷直接在普通玻片上涂片，诊断率低。LCT对肺癌有更高的诊断率。国内也有少量文献报道。本研究结果显示，经过与组织病理学对照，普通涂片法检出敏感度为33．19%，而LCT检出敏感度为58．33%，较普通涂片法提高了25．14%，差异有统计学意义(P＜0.05)。

细胞技术论文篇2

1.2农药百草枯

对多巴胺系统具有神经毒性作用，从而导致PD样症状和改变。Betarbet等利用鱼藤酮复制出了类似PD的大鼠模型，其症状包括出现震颤、步态不稳等。某些PD患者的脑组织中所含有机氯农药，如林丹、狄氏剂的水平明显高于对照组。代森锰（一种杀真菌剂）也被报道与PD的发生相关。还有研究发现，有机磷农药同样与PD的发病相关。

1.3环境毒素

1983年，美国有人吸食了含有1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）的海洛因后出现了典型的PD症状和病理学改变，研究者受到启发用灵长类复制了MPTP的PD动物模型。研究人员经过实验证实，MPTP对多巴胺能系统具有神经毒性从而导致PD样症状和改变。此后，MPTP的PD模型开始被应用于试验中。另外，Shepherd等发现，MPTP还可明显增强百草枯对多巴胺能系统的损害。

1.4其他因素

PD的发病还与很多种因素相关。有学者经过研究发现，摄入过多的脂肪，罹患PD的概率也会增加。Miyake等发现摄入花生四烯酸和胆固醇会增加PD的发生概率。Kyrozis等通过对希腊人饮食习惯的研究发现饮用牛奶也和PD发病有关。Kotagal等发现高血压等心血管危险因素与PD发生具有一定相关性。Aryal等还发现，四氢生物蝶呤（BH4）等增加会导致PD初期病情的恶化。Willis等发现居住环境与PD的发生也有一定关系。

2PD发病机制的研究手段及应用进展

2.1概况

当前的PD研究手段包括动物模型，细胞模型和iPScs模型等。动物模型为PD发病机制最早的研究方式。Maneuf等早在20世纪50年代就通过对啮齿类动物注射利血平的方法使其产生类似人类的PD样症状。此后研究者们又相继积极研发出了6-羟多巴胺模型，百草枯模型等。基因敲除和转基因小鼠模型在PD研究中也有应用。细胞模型包括肾上腺嗜铬瘤细胞系（pheochromocytomacells，PC12）细胞模型，SH-SY5Y细胞模型等。大脑结构复杂性的缺乏和较短的模型寿命意味着小鼠等动物模型难以详尽地阐释人类的疾病，细胞模型也并没有可靠地显示出在PD患者身上所观察到的缓慢的疾病进程。近几年，新兴的iPScs技术，将来源于PD病人的iPScs可分化为中脑多巴胺能神经元，在体外模拟其生理特性，可方便研究人员在更接近人体内环境的条件下研究PD的发病机制。

2.2iPScs技术的发展

iPScs技术是干细胞领域近几年来比较热门的一种新兴干细胞技术。该技术通过病毒载体或其他特异载体将特定转录因子的组合转入到被诱导细胞中，进而将已分化的体细胞重编程为未分化的多能细胞。2006年Takahashi成功将小鼠成纤维细胞重编程为与胚胎干细胞特征相似的诱导性胚胎干细胞，即iPScs。他利用逆转录病毒将4个与多能性相关的基因Oct-4、Sox2、Klf4、c-Myc组合导入被诱导细胞，再经过多能性分子Fbxl5筛选，从而得到在多方面与胚胎干细胞很相似的多能性细胞。随后成功诱导出iPScs。2008年Nakagawa研究小组使用了Oct3/4、Sox2、Klf43个基因，避免了原癌基因c-Myc的插入使得iPScs更安全化，利用Nanog代替Fbx15作为筛选标记，从而进一步提高了筛选的特异性。2009年，Woltjen研究小组以转位子为载体代替了逆转录病毒，所得到的iPScs避免了病毒基因的顽固表达和插入突变等风险，从而使得临床应用风险进一步大大降低。另外，直接将重组蛋白质导入体细胞以及利用合成mRNA进行转染等方法也显著降低了突变的危险性。有报道称体细胞可以通过小分子复合物而不依靠病毒来实现重编程。还有研究者发现毛猴素，二甲基五羟色胺和D4476可作为Oct3/4的化学替代品。随着研究的深入，iPScs技术愈加成熟，不断进展的诱导iPScs的方法既可有效消除重编程造成的种种潜在危险，又可以简单快速地获得iPScs。

2.3利用iPScs技术进行环境、职业致病因素

诱导PD发病机制的相关研究由于环境因素和遗传因素相互影响的复杂性，环境职业因素对PD作用相关的研究具有一定难度。Aboud等以无PD遗传危险因素者为对照组，以PARK2等位基因功能缺失且具有PD家族史但是还未出现症状者为实验组建立了观察锰神经毒性差异的iPScs模型。来源于实验组和对照组的真皮成纤维细胞的iPScs被分别诱导分化为早期神经神经前体细胞。经过测定发现两组神经前体细胞在对锰毒性的敏感性和线粒体分裂等方面几乎没有差别，但是实验组与对照组相比，活性氧显著升高。经过测定发现实验组与对照组相比，锰在细胞内的沉积明显减少，表明在锰沉积率相同的条件下实验组神经前体细胞对于锰毒性的敏感性比对照组高。但是锰沉积明显减少的原因是否与PARK2突变有关尚不清楚。Kikuchi等将人体iPScs来源的的神经前体细胞在无血清、无饲养层条件下培养至28d和42d后分别定向性植入MPTP处理过的猴子双侧豆状核，植入6个月后。磁共振成像（MRI）图像显示移植的细胞在猴子的大脑中存活增殖。由于MRI图像与猴子脑片苏木精-伊红染色的结果具有一致性，他们利用MRI来观察移植细胞的增殖情况。培养至28d的移植细胞增殖迅速，而培养至42d的移植细胞增殖相对缓慢。他们还发现移植后1~3个月的细胞倍增时间明显短于3~6个月，说明细胞的增殖能力在后期开始下降，但至少可以在猴脑内存活6个月以上。他们又通过描述行为评定量表发现移植后猴子的行为较之前发生了一些进步，表明人体iPScs在未来临床试验中的治疗潜力。Deleidi等通过逆转录病毒将人类KLF4，SOX2，OCT4和c-MYC导入恒河猴皮肤成纤维细胞，获得iPScs后进一步将其诱导为多巴胺能神经元细胞并植入6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的小鼠PD模型的纹状体，移植细胞在移植16周后进行组织分析发现具有酪氨酸羟化酶阳性细胞，且小鼠的纹状体中显示出神经的再生现象。他们还发现这些动物的同侧旋转行为等在移植后均有所恢复，而且移植6个月后这些小鼠既没有产生肿瘤，也没有发生炎症反应，进一步证实了iPScs在PD等神经退行性疾病在临床治疗方面的安全性。Chang等的研究证实了二十二碳六烯酸处理过的iPScs来源的多巴胺能神经元前体细胞植入到6-OHDA诱导的小鼠PD模型体内，小鼠的症状在4个月后得到了一定的缓解。Peng等将来源于iPScs的神经多巴胺能神经元建立起1-甲基4-苯基吡啶离子（MPP+）模型和鱼藤酮的PD体外模型，对44种可能对PD有治疗作用的药物进行了两轮筛选，并利用具有神经保护作用的神经营养因子作为阳性对照。经过MPP+的初筛和确认筛检，他们发现其中16种药物对于MPP+诱导的神经细胞死亡显示出神经保护作用，并利用MPP+模型建立起了这16种药物的剂量反应曲线。经过鱼藤酮模型的筛检他们更加明确了这些药物对于鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡确实具有一定的保护作用。这种方法可以应用于可能具有临床疗效的PD药物的检测来缩短药物进入临床的时间，并可增加临床实验成功的可能性和个体化治疗的可能性，为明确药物疗效提供了良好的平台。

细胞技术论文篇3

专利权人与人类胚胎干细胞提供者之间的利益分配问题主要在于后者是否应获得财产利益的问题。对于人类胚胎干细胞提供者财产利益的保障问题，目前世界各国尚处于理论讨论的层面。在国际规范方面，《关于遗传资源的获取及公平和公正分享因利用该资源而产生的利益之波恩准则》将人类遗传资源的利益分享排除在全球遗传资源的专利保护和商业开发的惠益准则之外。在法律实践中以美国的莫尔案（Moorev.RegentsoftheUniversityofCalifornia）和格林伯格案（Greenbergv.MiamiChildren’sHospitalResearchInstitute，Inc.）为主要代表的判例均未给予生物材料提供者以经济利益。此外，我国的《人类胚胎干细胞研究伦理指导原则》的第7条规定“禁止买卖人类配子、受精卵、胚胎或胎儿组织”。我国的《专利法》以及相关规定亦没有对人类胚胎干细胞提供者给予利益分享的规定。然而，在生物技术发明的专利保护过程中，对生物材料提供者利益的有效保障是非常重要的。可以说，生物材料是否充分有效，直接影响到生物科学研究的成败。可想而知，作为理性人的人类胚胎干细胞提供者是难以接受自己提供的人类胚胎干细胞及延伸产品获得专利并取得收益而自己却无法分得一杯羹的现实的。

（二）人类胚胎干细胞提供者财产利益分享的可行性及制度设计

撇开保守主义者以胚胎是“人”为由反对人类胚胎干细胞技术专利保护不谈，反对人类胚胎干细胞提供者获得利益分享的观点和理由主要有以下两方面：其一，有人以洛克的“财产权劳动理论”为依据，认为人们需要通过自身的劳动方能获得财产。这些人认为，胚胎提供者并没有为人类胚胎干细胞发明进行过创造性劳动，因此人类胚胎干细胞发明的专利利益不能为其所分享。其次，一些结果主义者则认为，人类胚胎干细胞的有偿提供将会导致不良的社会后果。他们认为这将会诱使一些妇女为了获得钱财而故意怀孕并堕胎，更可能诱发强迫妇女怀孕并获得胚胎的犯罪行为等。笔者认为，上述反对人类胚胎干细胞提供者获得利益分享的理由并没有很强的说服力，反对者的担忧亦非不能解决。以财产权的劳动理论为依据，反对人类胚胎干细胞提供者获得利益分享的观点不免有些不切实际。我们知道在财产权的哲学理论中，劳动理论具有重要的地位，但知识产权作为财产权中的一个权利，具有其自身的特点。在科学技术迅速发展的今天，知识产权的激励理论（也称“实用主义学说”）在专利制度的构建中发挥的作用已经远远超过了“财产权的劳动理论”。正如有学者指出“劳动应得说将智力创造完全类同于物化劳动，因而无视知识产权制度的政策性与工具性特点，存在无法适应智力成果市场化需要的固有缺陷，因而逐渐被实用主义学说所代替”。依据知识产权的激励理论，只要为发明专利做贡献的人就应当获得相应的报偿。因此，对人类胚胎干细胞提供者进行利益分享是符合当前知识产权制度理念的。至于有人担心人类胚胎干细胞的有偿提供可能引发一些不良社会问题，也是可以通过制度设计解决的。针对人类胚胎干细胞供需关系中可能出现的胁迫、诱导等问题，在加强相关法规规范的同时，我们可以效仿英国的干细胞银行模式，建立健全我国的人类胚胎干细胞银行。英国在2003年建立了干细胞银行（UKStemCellBank，UKSCB），UKSCB保存并鉴定人类成体、胎儿及人类胚胎干细胞系，建立了完善的质量控制系统以确保细胞系的安全及稳定。因此，我们也可以建立人类胚胎干细胞银行并制定相应的人类胚胎干细胞选取标准，通过人类胚胎干细胞银行这样一个代表公共利益的中间机构来切断人类胚胎干细胞交易的利益链，以防止不良的社会影响。强制规定研究机构所需的人类胚胎干细胞必须来自于人类胚胎干细胞银行，而人类胚胎干细胞提供者也只能向人类胚胎干细胞银行提供人类胚胎干细胞。同时，人类胚胎干细胞银行依据人类胚胎干细胞提供者的相应技术贡献和专利市场价值等因素向其支付相应的报酬。如此一来，不仅可以有效筛选出合格的人类胚胎干细胞作为研究材料，还能有效消除人类胚胎干细胞供需利益链可能带来的不良社会影响。因此，有效平衡专利权人和人类胚胎干细胞提供者的利益是促进人类胚胎干细胞发展的重要举措。我们应以知识产权的激励理论为主要依据，给予人类胚胎干细胞提供者相应的利益回报，并建立健全相应的公共管理机构以保证人类胚胎干细胞供应链的有效合法运行。

二、不同国家之间的利益博弈

（一）南北国家在生物技术

知识产权保护中的利益博弈现状发达国家为了维护自身在先进技术中的优势地位，其主导建立的世界贸易组织（WTO）就给发展中国家的加入设置了许多门槛，迫使发展中国家以自己的资源换取发达国家的先进技术。《与贸易有关的知识产权协议》（简称：TRIPS协议）更是让知识产权利益保护的天平严重倾向于发达国家。在发展中国家长期努力的交涉后，发达国家才在药品专利和基因遗传资源方面做了一些让步。《关于TRIPS协议和公共健康的多哈宣言第六段的执行决议》的修改是WTO成立以来发展中国家取得的重要胜利。这一修改较好地实现了药品专利权和公共健康之间的利益平衡，使发展中国家的民众能够买得起药品。针对发展中国家与发达国家遗传资源的丰富程度与利用能力成反比的问题，发展中国家与发达国家通过长期的谈判后达成了以《生物多样性公约》、《粮食与农业植物遗传资源国际条约》和《波恩准则》为主的国际条约。试图通过这些国际规范，实现南北国家之间的利益平衡。此外，发展中国家也依据本国的国情建立较为宽松的知识产权保护体系，力求在整体上维护发展中国家自身的发展利益。

（二）各国对人类胚胎干细胞技术

专利保护的不同态度及法律实践因涉及伦理道德的问题，不同团体对人类胚胎干细胞技术的可专利性问题争论激烈，但政策制定者都清楚地认识到———人类胚胎干细胞技术的专利保护将有助于一国在再生医学的国际竞争中获得巨大的优势。因此，各国的政策制定者试图最大限度地减少对人类胚胎干细胞技术专利授权的限制。以美国为例，在2008年，美国专利商标局（USPTO）就WARF案做了最终决定，维持780号专利和806号专利的有效性，可见美国对于涉及人类胚胎干细胞的专利申请明确持其可授权的态度。作为发达地区的欧洲，对于人类胚胎干细胞发明的可专利性争议可谓是最激烈的，反对者认为人类胚胎干细胞发明专利违反了欧盟《关于生物技术发明的法律保护指令》中“人类胚胎干细胞不得用于商业或工业目的”和“不得违反公序良俗”条款。WARF的三项专利在欧洲的专利授权过程可谓一波三折，但是，欧洲专利局（EPO）对WARF案最终以“不直接破坏胚胎或者基于现有细胞系的人类胚胎干细胞研究可以获得专利授权”的判决告终。日本作为人类胚胎干细胞技术的强国，面对国内对人类胚胎干细胞的可专利性的争议，采取了迂回路线，最大限度地授予人类胚胎干细胞技术专利权。在日本的专利实务审查中，对于从现有细胞株中获取人类胚胎干细胞的发明可以授予专利。可以看出，虽然发达国家国内理论界对人类胚胎干细胞可专利性的争议很大，但发达国家在政策上试图以最大程度限制不授予人类胚胎干细胞发明的情况，以保证他们在人类胚胎干细胞技术领域的全球性优势。而发展中国家由于人类胚胎干细胞技术水平相对较弱，基本上未将人类胚胎干细胞技术纳入专利保护范围。发展中国家试图放宽专利保护的强度，使本国在人类胚胎干细胞技术的全球性传播中获得更大的国家利益。我国的《专利法》第5条以违反公序良俗为由拒绝授予人类胚胎干细胞技术专利权的做法亦存在知识产权战略上的考量。

（三）国家政策对人类胚胎干细胞技术

专利保护的重大影响虽然在整体上，发达国家对人类胚胎干细胞技术的专利保护力度强于发展中国家，但是发达国家由于国内的激烈争论，对人类胚胎干细胞技术的专利保护也是裹足不前。对于该项技术的可专利性可谓“见仁见智”，此时国家政策对人类胚胎干细胞技术可专利性的影响就变得举足轻重了。以亚洲为例，一些国家希望趁西方科技大国踌躇不前之际，倾力于干细胞的研究，以一举提升科技水平、商业利益及国际形象，新加坡政府是这其中最突出的代表。新加坡对人类胚胎干细胞的伦理道德等问题没有太多的忌讳，以宽松的专利政策吸引了一大批在其他发达国家难以施展才华的科学家，使新加坡一举成为了人类胚胎干细胞研究的圣地，也为新加坡在新一轮的再生医学国家竞争中赢得了优势地位。

细胞技术论文篇4

细胞工程课程在生物科学中的开设，是以普通生物学、生物化学、医学遗传学、细胞生物学、分子生物学、微生物学、免疫学等先修课程为基础。同时，将本课程的学习与基因工程、生物技术等课程的学习互相补充和相互促进，为将来从事生命科学基础理论研究、生物制品的开发和应用、疾病诊断技术的开发与应用等领域的工作打下必要的基础。在教材方面，以李志勇编著《细胞工程》(高等教育出版社)为基本教材，以杨吉成编著《细胞工程》(化学工业出版社)、安利国编著《细胞工程》(第二版，科学出版社)等为主要参考教材。在教师队伍配置方面，既有细胞生物学领域教学经验丰富的教授，也有年富力强的专业知识扎实的中青年骨干教师。细胞工程的理论教学和实验教学全部由既具有扎实生物工程学相关知识背景，又有基础细胞理论与实验技术背景的骨干教师承担。

细胞工程教学内容的设定与改革

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1•1血液净化技术文献的分类问题血液净化为近年来迅速发展起来的一门交叉学科,它最早用于对肾脏疾病的治疗。目前,由于生物材料、微电子学、分子生物学等领域技术的高速发展,使它被广泛地应用于医学各专业中,成为现代医学不可缺少的一种治疗手段。有关它的文献亦逐渐增多。然而,在第四版《中国图书馆分类法》中却仍只有“R459•5透析疗法”类名归列此类图书。事实上,透析疗法仅是血液净化疗法的一部分,血液净化还包括血液滤过、血液灌流、血浆置换、免疫吸附、脂蛋白分离及连续性肾脏替代疗法等。

1•2血液净化的文献分类建议由于透析疗法仅是血液净化疗法的一部分,而血液净化疗法亦非肾病之独术,各种创伤、心、脑、肺、肝、胃肠、血液、骨关节、内分泌等诸病均可运用血液净化疗法,可说该疗法已广泛应用于医学各个专业中。故此,建议将《中国图书馆分类法》中的“R459•5透析疗法”类名更改为“R459•5血液净化疗法”。

2造血干细胞移植技术

2•1造血干细胞移植的文献分类问题造血干细胞移植(HSCT)是指经大剂量放化疗或其他免疫抑制预处理,清除受体内的肿瘤细胞、异常克隆细胞,阻断发病机制,然后把自体或异体造血干细胞移植给受体,使受体重建正常造血和免疫功能,从而达到治疗目的的一种治疗手段。最早的移植,始于1958年,Mathe等首先对5例南斯拉夫核事故中受照射3GY以上的患者进行了骨髓移植治疗,并取得了对造血恢复的较好的效果,随后得到较大发展,是在法国医师Gluckman教授进行世界上第一个脐带血临床移植治疗Fanconi盆血并获得成功之后,从那时起,生物工程、医疗设备及药物等相关学科的迅猛发展,使造血干细胞移植的临床实践进展就更快了,仅截至于1998年,全世界就有6万~7万患者成功地接受了造血干细胞移植治疗。相应地,有关造血干细胞移植的出版物也快速增长。目前,现有第四版《中图法》的问题是,它没有明显的类名可归列此类文献,同时也未做注释说明,给人们分类、检索该类文献带来了诸多不便。例如,经粗略检索,有些馆之间,以及在版编目数据所示的分类号表明,对同类文献的分类存在很大的差别。如中国版本图书馆图书在版编目(CIP)数据显示:河南科学技术出版社2000年出版、韩忠朝主编的《造血干细胞理论与移植技术》,分类号:R331•2;军医出版社2001年出版、董陆佳主编的《现代造血干细胞移植治疗学》,分类号R617;人民卫生出版社2000年出版、达万明主编的《外周血干细胞移植》,分类号R457•1;人民卫生出版社2003年2月出版、RuthKirschstein主编的《干细胞研究进展与未来》,分类号Q24∑11;……等等,从这些对比,可对该类文献分类标引的不一致略见一斑。

2•2造血干细胞移植的文献分类建议在第四版《中图法》中,与“造血干细胞移植”内涵紧密相连的,当属R457•7的“骨髓移植”类。所谓“骨髓移植”,是指对病人实施免疫抑制预处理后,使机体失去排斥异体组织的能力,通过移植骨髓来重建造血功能的治疗方法。由于骨髓中含有丰富的造血干细胞,故它与外周血、脐带血一起,是造血干细胞的主要来源,骨髓移植是造血干细胞移植的方法之一,是造血干细胞移植技术的一部分,造血干细胞来源之一是骨髓,二者是整体与部分的关系。有鉴于此,笔者以为,宜将:

细胞技术论文篇6

一、细胞工程教学现状及存在的问题

重庆三峡学院生物技术专业于2007年开始招生，已经经过5年的专业建设，目前，已经形成了较完善的理论实践教学体系。但毕竟生物技术专业招生较晚，细胞工程相关课程的人才储备不足，还没有形成知识结构完善、人才梯度合理和水平较高的师资队伍，另外，实验条件薄弱，特别是无菌细胞培养与操作室要求严格，运行费用较高，难以建成。为此，在借鉴其他地方本科院校经验的基础上，根据自身特点，构建新的教学大纲，使细胞工程教学步入正轨。

二、细胞工程课程改革的总体构想

1.理论教学改革。

（1）突出重、难点，优化教学内容。在教材的选用上，国内虽然有不少版本的细胞工程的教材，但这些教材有的偏重应用、理论缺乏，有的可读性差，不易理解。因此根据我们多年的教学经验，上海交通大学李志勇先生主编的《细胞工程》系统地介绍了细胞工程的基本原理、方法、技术和最新发展，可以作为地方本科院校的教学参考书。但细胞工程发展很快，一些新的研究进展在教材中并没有体现出来，针对这个情况，一方面我们向学生推荐了一些参考书，另外自行编写了符合教学要求的讲义，下发给学生。同时，由于课时的原因，在教学过程中，不可能做到面面俱到，只能选择性地讲解。这就要求教师将教材中相对笼统、分散以及过时的内容，通过总结归纳、提炼和补充等再加工，应用有效的方法手段突出重点（基本概念和基本原理）和难点（容易混淆的概念和难理解的机制），并进一步结合实验课中的实际操作合理安排教学进度及教学方法[3]。

（2）改革教学方法。激发学生的学习兴趣，发挥学生主体主动性。大学教学往往采用灌输式教学模式（教师讲，学生听，教师写，学生抄）。启发式教学则注重教的目的是学，这样教师就由知识的传输者转变为学习的引导启发者，激发学生学习的主动性，发挥想象力空间。在教学过程中，为了调动学生参与课堂教学的主动性、积极性，我们选择细胞工程的某一章节，尝试让学生体验课堂教学，以培养学生的独立思考能力、查阅文献能力、总结归纳能力及语言表达能力[4]。通过这种教学方式，也为准备从事中学生物教学的本科生提高锻炼的机会，深受大家的欢迎。具体来说，提前三周布置教学内容，要求学生在空余时间利用百度等搜索引擎及CNKI、维普、万方、Elsevier、NCBI等专业检索工具，选择感兴趣的内容检索查阅相关资料。一般选择学生感兴趣、应用性较强、与生产实践联系紧密的内容，比如在学到动物细胞培养章节后，让学生课外查阅动物细胞培养在医药、食品等领域比较成功的案例，将工厂生产过程做成多媒体课件，教师选择几个比较有代表性的课件内容，在下次上课时让学生课堂讲解，然后教师点评，并强调本章节需要掌握的重、难点，可以作为学生部分的平时成绩。

注重师生互动，积极引导学生学习，关注学生情感，建设和谐课堂，拉近学生与教师之间的距离。利用上课前的几分钟时间，对前面的内容特别是上节课的内容提出问题，让学生思考回答，以巩固所学内容和检查学生课后的复习情况，同时又可以衔接本节课的讲授内容，一举两得。在课堂上介绍一些重要人物科学研究的故事、实例和经验教训，积极地引导学生进行科学的思维，培养他们的推理能力；同时鼓励学生运用所学知识来分析一些自然现象，发现和解决问题[5]。

优化多媒体教学。细胞工程是一门应用性和技术性很强的学科。理论教学过程中需要很多图表进行讲解，技术中的很多操作环节，如无菌操作、动植物细胞培养等操作严格规范，但传统的板书教学难以保证教学效果。利用多媒体教学，可以很直观地观察操作过程，提高了学生的感官认识，利于操作技能的掌握，加深理解深奥的理论知识。运用多媒体教学时，还应该留出一段时间进行师生、学生与学生互动，有利于学生更好地消化掌握所学内容，充分调动学生的参与意识。

2.实践教学改革。地方本科院校细胞工程类课程实验条件普遍薄弱，需要整合教学资源，优化教学内容。精选实验教学内容，彰显细胞工程实验课程的重点与难点，注重基础实验操作训练，侧重地方本科院校学生应用能力培养，显现课程特色。考虑到我校细胞工程实验室自身仪器较少，实验室运行成本较高，不能够完成“动物细胞原代培养”、“单克隆抗体制备”、“真核细胞转基因技术和检测技术”等技术复杂、成本高的实验，因此选择动、植物细胞培养技术作为主要的实验内容，有的实验还选用演示的方法进行教学，将实验内容分为四个模块，即基础实验、动物细胞工程、植物细胞工程、综合设计。这样既注重了基础操作，利于学生毕业后工作衔接，又突出了创新。

总之，课程教学是实现本科生教育培养目标的重要手段[6]。在我国，细胞工程课程开设较晚，目前还没有形成系统有效的教学模式，地方本科院校因其特殊性，很多细胞工程师资配备有限，实验条件缺乏，有的学校甚至还不能开设细胞工程实验课程。为此，我们依据生物技术专业学生的培养目标，根据教师在细胞工程理论和实验课程教学中的经验与教训，从教学目标、理论教学和实践教学等方面进行了积极的探索与改革，取得了较好的效果。

参考文献：

[1]梁亦龙，魏进民，张继承.细胞工程教学改革的探索[J].实验室科学，2009，（4）：25-26.

[2]王伟霞，李福后.生物技术专业《细胞工程》课程建设与改革[J].科技创新导报，2008，（9）：245.

[3]吴晓丽.提高《植物生理学》课程教学质量的探索与实践[J].科技信息，2012，（1）：286-287.

[4]王海英，刘玲玲，阎晗.细胞工程教学与大学生创新素质培养初探[J].黑龙江教育学院学报，2010，29（10）：91-93.

[5]周春菊.提高植物生理学教学效果的体会[J].高教论坛，2006，（05）：138-139.

[6]王义，刘思言，孙春玉等.在《植物细胞工程》课程教学中培养学生科研能力的思考与实践[J].中国校外教育（理论），2008，（9）：85-86.

细胞技术论文篇7

细胞工程是以细胞生物学和分子生物学为理论基础，应用于生产实践，在细胞水平和细胞器水平，根据人们的需要和设计来改变细胞内遗传物质并获得细胞产品的一门综合性应用性技术学科[1、2]。应用型地方本科院校在师资力量、实验仪器设施条件等方面相对较弱，为了适应应用型本科院校为社会培养应用型人才的需要，提高学生的学习积极性，为学生以后走上工作岗位或继续深造奠定坚实的基础，笔者在细胞工程课程教学改革方面进行了一些初步的探索，取得了一定的成效，现总结如下。

一、教学内容改革

细胞工程是生物工程专业的一门实践性和应用性很强的专业课，也是生物工程的一个重要方面，包括植物细胞工程和动物细胞工程两方面。我校是一所地方性本科院校，有生物科学与生物工程二个专业开设细胞工程专业选修课，根据我校“注重学理，亲近业界”的才培养理念和具体专业特点，教研组组织任课教师进行讨论，确定教学内容，制定教学大纲。

在教材选择上，我们选择科学出版社出版的杨淑慎主编的《细胞工程》为教材，同时参考整合其他现有教材内容，编写教学教案，并根据细胞工程发展快的特点，在教学教案中增加近期研究新进展。

在教学内容上，不同专业教学内容有所侧重[3]；生物科学专业尤其是农业生物技术专业在教学中以植物细胞工程内容为主，动物细胞工程内容以自学加讨论的形式来完成，在教学中着重讲解植物细胞工程的原理与基础，并结合实例讲解植物无性快繁技术、植物脱病毒技术、植物细胞培养与次生代谢产物的生产技术、植物胚培养技术等；生物工程专业尤其是生物制药专业以动物细胞工程内容为主，植物细胞工程内容以自学加讨论的形式来完成，在教学内容中重点讲解动物细胞体外培养技术及细胞培养中的注意事项、动物干细胞培养与诱导研究进展、动物单克隆抗体制备原理与技术、动物体外受精与胚胎移植技术、动物染色体工程等。

在教学过程中围绕细胞工程的理论基础一基本技术手段一主要应用领域一最新研究进展一发展前景的主线进行讲解，根据具体情况适当增加细胞工程的最新进展，将细胞工程领域的研究成果引入教师教案，丰富更新授课内容，如介绍近年来诺贝尔生理学或医学奖获奖成果等，这些内容可以激发学生的学习兴趣，增强其对细胞工程的认识和探索未知领域的决心。

二、教学方法改革

细胞工程是一门专业基础课，在传统的教师课堂讲授基础上，我们探索以专题形式进行课堂教学，开学公布教学方案及计划进度，提前一周布置任务，课堂上围绕专题进行以学生为主的教学讨论，教师根据课程内容及时进行补充与总结，实现学生对细胞工程基础知识的理解和掌握。如在讲述植物细胞工程时，植物脱病毒技术作为一个专题，提前一周让学生进行预习，课堂上用学生参与的形式边讲解边提问同学生一起总结植物脱病毒技术的原理、方法、应用及成就等；在讲述动物细胞工程时，单克隆抗体作为一个专题，以1975年Kohler和Milstein创立单克隆抗体生产技术，1984年获诺贝尔生理学或医学奖为引子，在课堂上让学生讲解并讨论单克隆抗体技术的理论基础、技术关键、应用及产业前景，充分激发学生的求知欲，鼓励学生积极参与到课堂教学过程中，让学生真正成为课堂的主体，变学生被动接受为主动学习。

细胞工程是近年来发展较快的一门技术性、实用性很强的专业基础课，是细胞生物学发展的实践应用，基础理论内容多，科学进展信息量大，应用性和实践性强，涉及多个实验体系和多种实验技能。根据细胞工程课程的课程特点与教学内容安排要求，为了使学生在有限的课时内充分理解领会教学内容，获得好的学习效果，在细胞工程课堂教学过程中，我们采用传统板书和多媒体教学相结合的手段，通过多媒体课件、视频和动画等现代化教学手段，展示细胞工程各种技术的原理和操作要点，把抽象的理论基础、技术关键用直观的图像演示出来，提高学生的学习兴趣，加深学生的理解，提高教学效果。

三、实验环节改革

细胞工程是一门实践性和应用性很强的课程[4]，由基本原理、基本技术、实践应用等三部分组成，根据我校实际情况，我们注重理论课教学的同时，不断完善实践教学体系，压缩原理和理论讲授学时，加大知识应用实践学时，在调整课堂理论课讲授的同时，增加了实验课和实习实训锻炼的课时，使课程结构更加适应细胞工程专业学习需求，符合我校建设服务地方的应用型本科院校的大方向。

通过多年的教学实践，在细胞工程实验教学中我们建立了包括课程实验和生产实习两个方面的实践教学体系。保留传统的基础性实验内容，如培养基配制、初代培养、继代培养、培养产物观察等内容，培养和训练学生细胞工程基础实验操作技能和细胞工程基本实验技术，并对实验内容进行整合和优化，在有限的实验课时和现有实验条件下，合理规划实验内容，使实验环节紧密衔接。结合课程内容，设计综合性实验，让学生组成团队自选实验材料、全程参与独立完成整个实验过程，从准备材料、配制试剂、高压灭菌、无菌操作到结果观察，统计分析，对学生的实验技能和实验技术进行全面的综合性训练，同时培养学生的团队协作精神和科学探究精神，也可以结合教师科研项目和大学生科技创新项目进行，提高学生的综合实验动手能力和基本的科研素质。另外组织学生观看细胞工程相关实训视频、与企业对接，参观相关企业、与企业领导和技术人员座谈交流、参加企业生产实习，真实感受细胞工程在生产中的应用，为毕业实践奠定基础。

四、考试改革

考核是教学过程中不可缺少的环节，通过考核对教学质量、教学效果的反馈进行检查，一方面，检查学生对知识的掌握程度，另一方面，教师可以在考核中发现教学中存在的问题，及时进行改进[5]。细胞工程课程考核分为三大部分，平时成绩占20%，实验成绩占30%，课程考试成绩占50%。平时成绩主要考核内容包括课堂表现（考勤，课堂提问）、专题讨论资料准备和课后作业等，是对学生平时表现的一种综合考核。实验成绩考核包括学生在实验课上的综合表现（实验报告、实验技能、实验态度等）、综合性实验和实习参观中的表现（实验实习报告、团队精神等）。期末考试在笔试试题设计上，提高主观试题的比例，降低客观试题的比例；表现为试题题型多样化，增加综合性试题和实验结果分析类题型，加强对学生分析问题解决问题能力的考核。引导学生平时加强学习，注重能力培养，防止以往教学过程中出现的期末突击复习应付考试现象，培养学生养成良好的学习态度，提高学生自主学习的能力。

细胞工程课程改革是我校生物工程专业课程体系改革的重要组成内容，其改革是一个长期的过程。我校是一所新建应用型地方本科院校，由于应用型教学师资技术基础弱、实验设施条件差，在培养应用型人才的教学目标和课程改革中对教师提出了更高的要求，在教学过程中不仅要不断学习和完善适合本校的细胞工程培养体系，更新自身的知识理论框架，而且在教学过程中要不断思考、探索和总结，与企业联姻合作，提高教学质量，为企业培养综合素质较高的具有创新能力的应用型人才。

参考文献：

[1]邵景侠，张小红，徐虹，等.《细胞工程》理论与实践教学的探索与研究[J].教育教学论坛，2015，（42）：117-118.

[2]姜振华，周大祥.地方本科院校细胞工程教学改革探索[J].教育教学论坛，2013，（27）：52-53.

细胞技术论文篇8

细胞工程是生物制药工业中的关键技术，它是利用动物细胞体外培养和扩增来生产生物产品，或者作为发现和测试新药的工具[1]。就目前而言，高校细胞工程技术教学中还存在着一定的问题，如教学内容陈旧，不适合生物类企业对职员的知识和技能需求；教学方法还停留在高等教育的初级阶段，教学效果不高[2]等。因此，我们必须加快细胞工程技术类型人才培养模式的改革，进行细胞工程技术教学模式和课程的改革与创新，通过有效的教育模式来提高教学质量，让学生既掌握细胞工程关键技术的基本理论和基本方法，又能掌握细胞工程学科技发展中产生的新技术、新方法，提高学生的创新能力。笔者从教学内容与生产、双语教学、生产学习与实验技能几个方面对提高技能型人才培养目标的教学模式进行了探索研究，以期培养学生的学习能力、实践能力、创新能力，全面提高教学的质量和效率。

1 教学内容与生产整合

细胞工程学课程内容是按照细胞的主要结构及其功能、相关技术讲解的，课程包括细胞工程学发展史、细胞工程学概述、细胞培养及生物学特性、细胞融合、干细胞工程学、细胞克隆及克隆动物与转基因动物技术等；考虑到细胞培养技术在科研中普遍应用，目前细胞工程学实验课另外开设了免疫组化、荧光细胞染色与细胞分选、流式细胞仪操作技术、图像处理等课程。

本科学习中，细胞工程学教学中主要以各种细胞培养为主要线索，了解细胞工程技术具有特定的研究方式，使得他们对细胞工程学有一个全面的认识。例如，动物细胞工程技术应用于诊断和治疗疾病的单克隆抗体生产，有几千种单抗用于生化检测，而单抗用于人体疾病治疗是近几年来生物制药的一个重要领域，有几十种单抗药物正处于临床试验中。通过实验，学生理解单克隆抗体生产制备技术，并掌握原代及传代细胞培养技术、培养细胞的观察方法、细胞融合和分选技术等方法和常用设备的使用方法，为以后的生产研究做好准备。又如，动物细胞表达系统表达的蛋白都是胞外分泌的，产物的分离纯化过程非常简单，但是由于细胞大规模培养技术比较复杂，目前仍处于发展完善阶段，因而许多重组蛋白仍选用原核表达系统生产。我们针对这个特点，启发同学设计较好的细胞大规模培养系统，如改装的灌流式培养方式，培养和启迪学生的创新思维。

2 普通教学与双语教学整合

在当前社会高速发展的时代，社会对细胞工程人才提出了更高的要求，尤其是生命科学院校毕业的学生能否跟上时代的步伐，面向世界进行生物学的交流活动，扩大细胞工程技术在世界的影响，这是细胞工程技术发展至关重要的事。

在细胞工程学原版教材的选择上要力求最基础的专业知识内容水平。我们选择的教材是中国海洋大学出版社2011年10月第1版英文教程《CYTOTECHNOLOGY》，该教材的特点是讲授的内容比较全面，语法简单，对专业性的概念、词汇以及分子水平的知识进行了浅显的讲解，比较适合用于高等院校学生进行细胞工程专业外语的学习，避免学生由于英语基础差，导致对抽象晦涩的细胞工程学课程双语学习产生反感情绪，利于完成双语教学工作。

3 生产学习与实验技能整合

学生创新能力和实践能力的缺乏是高等教育教学改革面临的问题[3]。因此，要带领学生参与科学研究与生产实验技能，强化实践教学环节。细胞工程技术实践教学中，联系生物制品企业生产学习很重要，如我们带领学生到福瑞邦制药的厂家参观学习单抗制备，让学生注意在实验操作中可能失败的原因性，出现问题，及时加以纠正，培养学生良好的实践能力。针对细胞工程学的实验教学特点，穿插设计探索性和综合性的实验内容，并让学生自己参与到实验内容的设计，并调动学生的独立思考能力和创新思维能力，培养实验技能和创新思维能力。

实验大纲列出的实验项目较多，可整合为三大部分：（1）细胞培养综合实验。包括培养技术及细胞观察，细胞培养实验还可以将兔角膜上皮、基质及内皮细胞种植于生物材料上进行体外培养，观察培养细胞的生长、排列和细胞的粘附情况等。（2）经典单抗制备综合实验。将单抗制备产生过程中的细胞培养、动物免疫、细胞融合，杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化，抗体检测5个实验内容整合为1个单抗制备设计性实验。教学中不为学生准备传统的实验讲义，只提出实验的任务、要求、进度及安全注意事项等，重点突出学生自行完成相关资料查阅，自拟设计方案，自己安排时间完成实验计划，获得实验结果，撰写实验报告。这个实验计划6个课时，2次课堂实验，分别以实验设计、中期实验讨论与交流、实验结果课件汇报为主要内容。（3）流式细胞仪分选细胞综合实验。包括分选淋巴细胞或是干细胞的筛选，要求学生根据生产实践需要（如奶牛细胞的分选、白细胞计数及分选等）自己选择课题，自己设计实验方法以及最后鉴定。这个实验计划12个课时，4次课堂实验，分别以实验设计、中期实验讨论、实验结果课件汇报为主要内容。所有实验的实验室全天性开放，学生可利用课余时间主动完成各项实验操作，老师指导，确保学生在30d内获得全部实验结果。老师可根据实验结果反馈及时调整教学进程和教学方法。通过学生的反馈，可以反映学生是否理解和掌握本课程的目标，并加强了教师与学生之间的沟通，提高了教学效果。

参考文献

细胞技术论文篇9

Research of the Development Trend and Countermeasure of Stem Cell Industry in China

Song Wei Li Caixia Shi Lin

（Scientific and Technical Information Research Institute of Jilin Province， Changchun Jilin 130033）

Abstract：Stem cell research in recent years is one of the most popular research directions in biomedical field， and is attached to great importance tby the countries all over the world in recent years， with great social benefit and market prospect. In the light of the current development situation of stem cell industry in China and the sustainable development requirements， the market demand for stem cell industry development， and its industrial targets， technical barriers，research and development needs are analyzed， The common key technologies in the industry are condensed， including the whole industry chain of stem cell collection and storage business， research and development of stem cell technology， stem cell transplantation and treatment， combination with other industries and so on. Technology development status quo of stem cell industry in China is studied， and related countermeasures for the development of stem cell industry are proposed.

Keywords：stem cells; development trend; innovation strategy; countermeasure research

1 引言

干细胞产业具有巨大的社会效益和市场前景，得到了世界各国的广泛重视。为了促进干细胞产业的发展，各国纷纷出台激励政策，增加研发资金投入，促进官产学研结合，从而促进干细胞产业的发展。近年来，我国通过大力支持干细胞研究和相关产业的发展，在各方面取得了较大的进展，但是和美国等发达国家相比，仍然存在较大的差距。本文采用技术预见的方法，研究我国干细胞产业创新战略，并提出明确的方案，为促进我国干细胞产业的技术与科技管理水平提供参考，同时也为干细胞产业创新战略的制定提供有益的参考和借鉴作用。

2 干细胞产业的发展背景分析

2.1 干细胞产业发展历史

干细胞的相关研究开始于20世纪60年代，1981年，Evans、Kaufman和Martin培养出了小鼠胚胎干细胞株;1998年，Thomson培养出第一个人类胚胎干细胞株;同年，Gearhart分离出人类胚胎生殖干细胞。2001年，干细胞成为生物医药领域的研究热点，尽管干细胞的研究一直受到伦理争议，但是，其在生命科学、新药试验和基本治疗等领域的巨大价值，仍然成为当今学界和社会各界广泛关注的焦点。

2.2 国外干细胞产业发展现状

在全球干细胞领域科学基础研究和技术研发中，美国处于领军地位。由于受到伦理压力的影响，美国干细胞研究人员获得的联邦政府资助有限，但是由于地方政府和私人资金的支持，美国在干细胞领域的研究仍然处于领先地位。2008年奥巴马当选总统，胚胎干细胞的研究政策得到改善，使一部分干细胞临床应用研究计划和临床试验得以开展，美国原有的研究实力加上新政策的解禁，以及产业界对于干细胞治疗的支持，美国的干细胞研究和产业前景乐观。

欧洲许多国家由于受到伦理的压力，胚胎干细胞研究受到一些影响。但是由于干细胞的重要性及应用前景，各国也纷纷开展了干细胞的临床实验。英国从2000年开始允许克隆人类早期胚胎，并从中提取干细胞，用于医疗研究[1]。欧盟目前正在进行的利用干细胞再生缺损或受损的组织或利用干细胞治疗癌症的临床试验大约有40项。

日本政府在“千年世纪工程”中把干细胞工程列为四大重点工程之一，并投入大量资金，鼓励有关科学家进行研究。日本科学家在诱导性多能干细胞（IPS）领域处于世界领先地位。韩国政府大力投资干细胞研究，计划到2015年，干细胞研究年度经费将达到9 800万美元，并建立至少5个世界级研究团队。

2.3 我国干细胞产业发展现状

我国政府十分重视干细胞研究，目前北京、上海、天津分别成立了干细胞研究中心，同时大力支持科研院所及高校开展干细胞研究，积极推进干细胞研究基地的建立。中国干细胞的科研和临床可能离国际差距不是特别远，因为起步时间都差不多，但是中国干细胞在法律法规上离欧美国家相差甚远。例如，我们国家围绕干细胞的法律法规还是停留在20世纪90年代末，干细胞领域发展已经经过了几十年，我们还是用几十年前的法律法规在调控：如干细胞的来源，我们从医疗废弃物，新生儿的围产组织里面可以分离出不同种类的干细胞，其中有脐带血造血干细胞，有胎盘间充质干细胞，有脐带间充质干细胞，其中脐带血造血干细胞大约占5%的比例，胎盘间充质干细胞占约90%，脐带间充质干细胞占约5%的比例。这几种干细胞现在还没有统一的法律法规来调控[2]。

相关的政策法规的滞后一方面造成了公众对干细胞的误解，即干细胞就等于脐带血;另一方面也严重阻碍了整个干细胞行业的发展，导致各地对脐带血保存这一行为是否合法的标准不一。比如干细胞的存储，按照现行法规，一位母亲如果在北京生孩子，储存孩子的脐带血造血干细胞是合规的，但是如果在河北生孩子却无法合规地储存脐带血造血干细胞――因为当地没有合规的干细胞库。这是法律法规滞后造成的不合理现象，亟须更改。在国外，比如说美国则有立法规定，医生在母亲新生婴儿出生时有告知义务，告诉孕妇干细胞存储这一事宜。至于孕妇是否选择保存以及通过那家公司保存，则由新生婴儿父母决定。实际上，在干细胞的储存方面，美国已达到10%，日本和韩国将近15%，而我国仅仅是千分之几。自身干细胞的储存能有效避免异体配型，对于救治疾病发挥能够很大作用。自从20世纪90年代起，国际上每年自体移植数量就已超过异体移植。

就干细胞行业的从业企业本身来说，水平也是参差不齐的。干细胞从采集到入库涉及诸多环节，如何保证细胞在整个过程中的安全性，是对从业企业的实力的考量。尽管目前国内有法规上的滞后、行业标准的欠缺，但是，国内从业企业可以向国际标准看齐。例如，从干细胞库角度来说，欧美已形成若干统一的行业标准。美国几乎所有的干细胞库都通过了AABB标准的认证，AABB是American Association of Blood Banks，即美国血库协会的缩写，是细胞治疗和输血领域的全球性标准。对于血液制品的质量检验，美国有CAP标准，即病理家协会标准（College of American Pathologists）;国际上则有公认的NRL标准，即血清学参考实验室标准（National Serology Reference Laboratory）。这是一些中国的干细胞从业企业可以借鉴并自发通过认证的国际。通过这些标准的认证，我们的干细胞企业才可以不断地提高自身的标准，完善自身的技术体系和质量管理体系。

3 我国干细胞产业发展态势研究

干细胞具有自我更新能力、高度繁殖以及多向分化的潜能，被医学界称为“万用细胞”，是再生医学的核心成分[3]。干细胞的产业化发展方向有上游的干细胞库、中游的干细胞扩增技术和质检技术，以及下游的干细胞产品，从而形成一条很大的产业链。干细胞产品又包括干细胞药物、干细胞移植技术、干细胞美容与抗衰老技术，以及组织工程中的种子细胞、基因治疗的细胞载体、基于干细胞的药物筛选模型等等。相信在不久的将来，干细胞的应用领域会不断扩大。

本文主要论述成体干细胞尤其是围产期组织来源的干细胞的产业化。成体干细胞主要包括脐血、脐带组织和胎盘来源的造血干细胞和间充质干细胞，以及骨髓来源的、脂肪来源的干细胞。围产期组织来源的干细胞由于其易获得性、较高的安全性，在产业化上走在其他种类的干细胞前面。国内外分析数据表明，围产期组织来源的干细胞的应用将超过其他种类的成体干细胞，成为再生医学的主力军。

3.1 市场需求分析

3.1.1 优势分析

目前我国有近两百家不同规模的干细胞公司，基本覆盖了从上游的存储到下游临床应用的完整干细胞产业链。2013年，中国已经建立起多家干细胞产业化基地，影响力较大的有国家干细胞产业化华东基地、国家干细胞产业化天津基地、无锡国际干细胞联合研究中心、青岛干细胞产业化基地等、西安干细胞人工皮肤产品产业化基地等[4]。大部分产业化基地的相关业务涵盖干细胞存储、干细胞技术研发、干细胞应用研究以及干细胞临床移植和治疗等业务。它们促进了干细胞技术从实验室向应用、向临床及基因工程药物科研成果向实际生产力转化，逐步推动形成新的干细胞研究和产业新格局。

3.1.2 劣势分析

各国在干细胞领域的知识产权优势，主要反映在专利上。根据欧专局的数据，目前，世界已有干细胞相关专利22 000余项。而我国知识产权局公开的干细胞相关专利仅有4 000项。可见，我国在干细胞的专利申请方面，处于弱势地位。在文献方面，中国作者发表的被SCI收录的论文数量及中文文献数量都只占整个干细胞研究领域很小的一部分。统计SCI收录的中国作者发表的论文所在期刊的影响因子分布，这些文献主要分布在影响因子较低的期刊。虽然，近年来我国在动物克隆和人类造血干细胞研究领域有所发展，但是总体水平偏低，竞争力较弱。在人类胚胎干细胞领域，我国的研究力量和研究水平较国外还有一定的差距，处于劣势。

我国虽然具有较强的资源和人才优势，但是缺乏有效促进产业科技创新的环境。同时，由于干细胞是新兴产业，目前还没有完善的法律法规和政策支持，使得一些企业只顾经济利益，在缺乏技术力量的情况下，夸大宣传，造成了一些负面影响。

3.1.3 机会分析

干细胞与再生医学的价值在于其不可估量的应用前景，但是和其他许多科学领域相似，通向成功的道路将会是曲折的。在2011年之前，中国的干细胞产业经历了一段蓬勃发展但同时也是乱象纷生的阶段，干细胞库和干细胞临床曾经治疗遍地开花。为促进干细胞治疗技术科学、有序地发展，规范干细胞临床研究和应用行为，卫生部与国家食品药品监督管理局于2011年决定开展为期一年的干细胞临床研究和应用规范整顿工作。

3.1.4 威胁分析

我国大部分干细胞企业还处于起步阶段，缺乏核心技术、人力资源和资金支持，主要的业务还是初级的脐带血干细胞收集保存。随着干细胞产业的不断发展，国外拥有强大研发和技术实力的干细胞企业势必加速进入中国抢占市场，未来对我国的干细胞企业发展将带来更大的冲击和挑战。

3.2 产业需求预测

我国是世界上人口最多的国家，干细胞产业的发展前景十分可观。只看造血干细胞一个领域，中国拥有大量的独生子女，这些独生子女获得同胞间干细胞的可能性非常低，而非相关供体间白细胞的配型相合率仅为十万分之一。而进口骨髓或者脐带血干细胞制品的价格非常昂贵。因此，将来中国将成为干细胞极其衍生组织需求最为迫切的国家。同时，国际干细胞公司也发现了中国市场的广阔前景。2009年，中国生物药业公司被美国Neo Stem公司正式收购，之后开始实施其在国内开发干细胞治疗方法的计划。同时，上海一家企业也与该公司达成了一项为期10年的独家协议，旨在利用Neo Stem的专有技术在上海、江苏等省市创建干细胞采集和治疗的中心网络。目前，中国干细胞业务已经成为该公司发展的核心战略之一，而这一系列动作表明外国干细胞企业已经充分意识到中国干细胞治疗市场存在的巨大潜力，并已在产业发展早期开始抢占市场。

3.3 与国外差距分析

近年来，我国通过大力支持干细胞研究和积极推动相关产业发展。干细胞领域的相关论文数和专利数量均有较大幅度的增加，有些领域已经处于世界较为领先的水平。但是，和世界顶级水平国家相比，还有较大的差距。和美国、日本、韩国等技术领先国家相比，我国干细胞研究和产业化水平还存在较大的差距。

3.3.1 我国干细胞领域的基础研究水平较低

据统计，2009年，我国干细胞研究文献发文数居世界第5位，平均被引频次仅为美国的1/2。在专利方面，我国相关专利的数量在世界并不占优势，专利的质量及其转化率也有待考察[5]。2009年，全球约有100多个重要的干细胞中心，而我国目前的基础研究能力和科研成果还无法支撑该领域的迅速发展。

3.3.2 科技成果转化效率较低

我国专利的专利权人大部分为科研机构，由于缺乏有效地产学研体系，研发机构和企业之间的合作也不活跃。目前，国际上已经批准的干细胞药物有8种，包括加拿大和新西兰批准的治疗儿童急性移植物抗宿主病的Parochial、韩国批准的治疗关节炎和关节软骨并的Cart stem等等，在此不一一赘述。而中国还没有推出自己的干细胞药物，与国外存在一定的差距。截至2010年5月26日，中国大陆地区共开展干细胞相关临床研究35项，中国香港3项，中国台湾地区共开展22项临床研究。与国际上在干细胞领域领先的国家相比，中国开展干细胞临床研究的数量明显偏少，中国干细胞科研成果向临床的转化进度还有待提高。

3.3.3 风险投资体系不完善，无法对干细胞产业的发展提供有力的支持

干细胞技术的开发和创新需要较长的周期、较大的经费投入和较大的风险，企业往往缺乏有效地经费来源，使得国内企业的创新能力明显不足。而国外企业，除了能够获得政府资助之外，还有来自于其他企业或个人的资金支持。如美国辉瑞公司曾向EyeCyte公司提供300万美元风险投资，支持其开展干细胞研究。

4 促进我国干细胞产业发展的对策建议

4.1 创新发展模式，全面支持产业发展

建立干细胞产业特区，在人才、经费等方面给予支持，搭建产学研合作体系

确立重点研究领域，打破常规，建立“政产学研用”联合研究开发机制，整合资源，统一管理。制定与产学研合作体系相适应的专利战略和发展规划，加强专利技术和产品的管理，实现利益共享;依托合作体系建立符合国际标准的规范化研究治疗基地，吸引国内外获批的干细胞产品进行联合开发;发挥国家人才计划先行先试作用，使各类人才培育计划向干细胞领域倾斜。

4.2 积极推动风险投资和金融资本进入干细胞产业

由于干细胞技术研发需要大量的资金支持，同时产业的发展也存在较大的舆论压力，政府投资无法满足技术研发和产业发展的需要。因此，迫切需要风险投资机制和政策环境的完善，促进风险投资对干细胞产业升级和技术研发的支持。充分发挥政府引导性基金的作用，鼓励国有和民间资本进入干细胞产业;加大对金融领域和干细胞研究领域复合型人才的培养力度，突破投资机构专业化不足的瓶颈。

4.3 完善政策法规体系建设

准确把握产业化进程中各环节的关键问题，制定产业发展规划，引导风险投资实施阶段性投资，从而降低投资风险。避免投资失效。加强科技管理部门和药监、卫生等部门间的交流与合作，共同探讨安全性和风险性评估等问题，使产品标准化和研究同步进行。

另外，加大对干细胞临床试验和应用的监管力度，使新的技术手段和临床安全性问题得到解决，提高我国干细胞研究的国际公信力;加强干细胞临床应用可能涉及的伦理学问题研究;抓紧进行干细胞专利申请及保护的理论研究，制订有利于干细胞产业发展的政策措施。

5 结语

本文重点从技术发展规律、动力等方面分析我国干细胞产业的技术需求状况和市场需求状况，分析我国干细胞产业发展同发达国家之间的差距，对产业的发展趋势进行预测，并提出了促进我国干细胞产业发展的对策建议。

参考文献：

[1] 陈涛，钱万强.国内外干细胞研究和产业发展态势分析[J].中国科技论坛，2011（10）：150-153、160.

[2] 上海市科技发展重点领域技术预见研究项目组.上海技术预见报告[M].上海：上海科学技术出版社，2006.

细胞技术论文篇10

1 临床病例

病例1，女，25岁，因“反复四肢关节肿痛三年余，伴全身浅表淋巴结肿大、肾功能损害3个月”于2008年9月28日来诊，曾在外院诊断为“①慢性肾功能不全；②系统性红斑狼疮？”来诊时疲倦乏力明显，四肢关节轻度肿胀，疼痛有热感，全身浅表淋巴结肿大，以颈部淋巴结明显，血肌酐、尿素氮轻度升高，血常规示为WBC 6.39×109/L，HGB 65 g/L，PLT 194×109/L，并可见一定数量幼稚细胞。入院后即行骨髓穿刺及骨髓活检术，作骨髓细胞形态学及病理学检查，并以血常规管抽取静脉血3 ml作流式细胞术分析。当日骨髓细胞形态学报告提示：淋巴瘤白血病。2 d后流式细胞检查结果回复：幼稚细胞占61.8%，其表型为CD34＋，CD117-，TDT＋，CD79a＋，CD33＋，CD13＋，HLA-DR＋，CD19＋，CD56-，CD38-，CD10-， CD14-，CD64-， CD2-，CD3-，CD5-，CD7-，结果符合前驱B急性淋巴细胞白血病/淋巴母细胞淋巴瘤。回顾临床资料，该患者起病以来血小板计数一直正常，并主要以淋巴结肿大、四肢关节肿胀疼痛为表现，符合淋巴母细胞淋巴瘤外周血和骨髓的受累很少导致血小板减少，以及该病主要以淋巴结和骨及骨关节易受侵的特点。以相应方案化疗后，患者病情较快缓解。骨髓病理检查结果于送标本后第10日回复，亦证实为B淋巴母细胞淋巴瘤白血病。

病例2，男，40岁。因“肢倦乏力、牙龈出血肿痛伴发热1个月”于2008年10月29日来诊，曾在外院经骨髓细胞形态学检查诊断为“急性髓性白血病-M5b”。来我院后即复查骨髓细胞形态学，并同时作骨髓活检及抽取3 ml骨髓液作流式细胞术分析。观察骨髓片发现其原始细胞虽然核型似M5，但胞浆颗粒相对增粗增多，不符合幼稚单核细胞特征，综合考虑M2可能性较大。2 d后流式免疫分型结果回复：其髓母细胞占总细胞的36%，表型为CD34＋，CD117＋，CD13＋，HLA-DR＋，CD19＋，CD56＋，CD38＋，CD64＋，CD4＋，CD2-，CD3-，CD5-，CD7-，结果符合急性髓性白血病-M2。数天后病理结果回复：符合急性非淋巴细胞白血病病理改变。以相应方案化疗后，第20天复查骨髓示CR。

病例3，男，22岁。因“诊断为急性淋巴细胞白血病1年”于2008年12月24日来诊。患者1年前因血红蛋白降低、血小板减少在外院经骨髓细胞形态学检查诊断为“急性淋巴细胞白血病”，其后在该院以急性淋巴细胞白血病化疗方案先后化疗8次，均未缓解，转诊我院拟行第9次化疗。翻阅其病历所记载化疗方案，均为正规急性淋巴细胞白血病化疗方案，且用药正确得当，那么患者化疗效果差的原因为何？是否白血病分型诊断有误？入院后即复查骨髓，细胞形态学仍考虑为急性淋巴细胞白血病，同时取标本作流式细胞术分析，2 d后结果回复示：CD34＋，CD117-，CD79a＋，cMPO＋，TDT＋，HLA-DR＋，CD19＋，CD10-，CD33＋，CD13＋，CD2-，CD7-， CD20-， CD56-，CD38＋， CD14-， CD64-，CD3-，CD5-，CD7-， CD15-，CD16-，结果符合急性双表型白血病，即予NA方案（米托蒽醌联合中剂量阿糖胞苷方案，对双表型有效）化疗，化疗后半个月复查骨髓示原始细胞比例小于5%。

2 讨论

白血病的诊断贵在快速、准确，以便临床上能及时以相应方案对患者进行正确救治。从以上三个病例可以看出，流式细胞术在白血病的诊断和分型中具有重要的应用价值，其基本原理是利用荧光素标记的单克隆抗体作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，从而深入地了解白血病的异质性，准确判断细胞的来源和所处的分化阶段[3]。由于它借鉴了荧光显微技术与血细胞计数原理，同时利用了荧光染料、激光技术、单抗技术以及计算机技术的发展，故其检测结果具备了精确、客观以及快速的优点[4]，在很大程度上弥补了骨髓细胞形态学带有较大主观性和骨髓病理学检查费时相对较长的缺点，从而为白血病的快速准确诊断提供了一个强有力的检测手段，值得临床大力推广应用。

[参考文献]

[1]黄晓军，刘开彦.白血病内科临床常见疑难问题及对策[M].北京:清华大学出版社，2007:17.

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在体液细胞学检查与诊断研究中，涂片及染色质量的好坏直接影响到病理诊断及研究结果的正确判断，而免疫组化结果有助于诊断和鉴别诊断间皮瘤和腺癌。传统的巴氏涂片在免疫组化质量上不能令人满意，如细胞重叠，色调不正、杂质多等，而我科在工作中经过不断的摸索，发现了液基细胞学薄层涂片技术应用于免疫组化中，获得了较满意的效果。

1、材料与方法

1.1材料来源：我科2010—2011年间以经巴氏涂片检查发现癌细胞的胸腹水36例，其中男20例，女16例，年龄35～80岁。所有病例都有手术标本的组织学对照，排除了肿瘤者为阴性病例。

1.2方法：新鲜胸、腹水250～500ml，留置时间复季＜2h，冬季＜4h。

1.2.1胸、腹水沉淀与固定将胸、腹水置于2个50ml的离心管中，每管50ml，2000～2500r/min离心10min，弃上清液，吸出部分沉积物常规涂片，剩余沉积物稀释后直接加入装有低浓度乙醇细胞保存液的保存瓶内备用，在保存瓶内至少放置15min以上。然后经thinprep-2000系统进行电脑程序化处理，制成直往为13mm的薄层细胞涂片（制作免疫组化涂片时，液基薄层制片机的染料临时用95%的无水乙醇代替），自然干片后，按常规免疫组织化学染色，封片、读片诊断。

1.2.2免疫组化用ElivisionTMPlus法。抗体有CEA、Calretinin、Cytokeratin5/6、CD68，均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

2、结果

采用液基细胞学薄层涂片技术制片36片，优质片36片，其优片率100%；采用传统涂片方法制片36例，优质片30例，其优片率83.3%，两者间差异显著。

3、讨论

液基细胞学检测是90年展起来的一项制片新技术，已成功的应用于妇科细胞学，并取得了成熟的经验。目前已经广泛用于宫颈癌的筛查，但在体液免疫组化中应用甚少。胸腹腔积液在常规细胞学检查中仍然是目前临床常用的诊断方法之一，传统的巴氏涂片法在体液的肿瘤细胞筛查上应用已超过半个世纪，但容易出现漏诊或误诊，主要原因是其标本的制作往往受到体腔积液的新鲜程度、细胞数量、退变程度、血细胞含量或炎细胞干扰、黏液过多涂片厚薄，固定状态等多方面因素的影响，造成涂片质量差，导致较高比例的假阴性率，假阳性率出现或干扰因素多导致免疫组化结果无法准确判读［1]，有作者认为背景中血细胞的多少与涂片质量有明显的关系，血细胞越多，往往有核细胞成分则少见，癌细胞也稀少，单个存在或不典型［2]。本文选用的液基细胞学薄层涂片技术对标本采集，制片技术及程序比传统涂片具有以下优点［3]：（1）通过离心，细胞均匀涂布形成一个直径13mm的细胞薄层，结构清晰，背景干净，改变手工涂片细胞拥挤、重叠，形态特点不易观察的缺点；（2）避免了细胞过度干燥造成的假象；（3）可以同时处理1～48份标本，并在全自动制片过程中同时完成细胞染色，也减少技术员对标本的接触。

传统的制片方法是将体腔积液离心后直接涂在普通的玻片上。这种涂片质量常不稳定，涂片厚薄不均匀，细胞重叠较重，而背景中又有较多的蛋白黏液，红细胞和各类炎细胞及间皮细胞相混杂在一起，影响细胞的观察，有些异常细胞甚至被遮盖，这些都容易影响诊断的准确性［4]。而液基细胞学薄层涂片几乎保留了离心后的所有细胞,并均匀分布于玻片上，去除了黏液、红细胞、炎细胞的干扰，肿瘤细胞形态保存完整、细胞核、核质、核仁更清楚，获得了三维立体结构。此外，标本储存在保存液中，可重复制片，抗原性不受影响，也可用来作特殊染色，采用液基薄层细胞学涂片技术制片提高了制片的质量，对腺癌和间皮瘤的诊断和鉴别诊断提供了有效的方法，提高了脱落细胞学对腺癌和间皮瘤的诊断价值,与传统制片方法相比，液基细胞学薄层涂片用于免疫组化中还节约抗体量，从而节约成本,值得推广应用［5]。

参考文献

［1]梁昌杰，吴秋良，梁小曼等.胸水涂片肿瘤细胞学诊断.广东医学，2001，22（11）：1046.

［2]杨霞，姚宇琪，王娟.液基细胞学（LPT）在体腔积液检查诊断中的应用［J]，中国实验诊断学，2009，13（2）：194-196.

［3]谢寿城，液基细胞学薄层涂片技术对宫颈疾病诊断中的应用价值［J]，中国实用医药，2010，1（5）：31—32.

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早在2000多年以前，克隆就已经融入到人的生活当中。果农广用嫁接等无性繁殖技术克隆亲代的优良属性，但直到1958年，现代意义的实验室克隆技术才得以最终确立。这一年，英国人Steward把一块成熟的胡萝卜组织成功分化克隆为一棵完整植株，从而证明了植物的成熟细胞仍然具有功能的完整性。

但动物细胞也同样具有全能性吗?首次动物克隆实验于1964年完成，并对这一疑问给出了肯定回答。英国人Gurdon把蝌蚪肠壁细胞的细胞核转移到已经去核的蛙卵细胞中，成功培育出了正常的成年蛙。这个由英国人确立的核转移克隆技术，奠定了该领域的实验标准，以后进行的实验只是在供核细胞方面略有不同。

虽然已经没有理论障碍，但是技术难度却一直难以逾越；诞生多利的种子已经播下，唯独土壤尚未准备就绪。在克隆曙光惊现20多年后，鱼、鼠、牛等克隆动物才依次登场，供体细胞都取自胚胎期。某些商业公司从中看到了商机，据悉，荷兰公司Pharming率先进行基因改造实验，让转基因动物在牛奶中产生了特殊蛋白质。此外，在延续生物反应器的生产能力方面，克隆技术也有用武之地。

多利“诞生记”

无独有偶成立于1989年的苏格兰PPL公司有着同样的野心，他与苏格兰罗斯林研究所合作，尝试克隆动物。为了规避利用胚胎细胞克隆动物所可能带来的伦理学困境，他希望从成年动物的体细胞中获得细胞核。

1991年，科学家基思•坎贝尔加入研究所从事博士后研究，他全面负责克隆羊的技术探索；当时他的顶头上司威尔穆特是罗斯林研究所的高级工程师，负责协调指挥工作。五年后，坎贝尔等利用前辈Gurdon创立的核转移克隆技术，成功克隆出世界上首批克隆羊：Megan和Morag。论文于当年发表于《自然》杂志上，但这篇论文当时并没有引起公众的广泛关注，因为他使用的是胚胎期细胞核。十年后再度回首这段历史，坎贝尔始终认为该论文的重要性甚至超过了多利的诞生――该论文最终奠定了克隆多利的技术基础，而他本人却是该论文的第一作者。

但最让克隆专家失望的是，虽然他决心从乳腺上皮细胞中获取细胞核在当时来说是无可厚非的(用此方法获取的细胞核是和胚胎成纤维细胞最接近的体细胞)，但核受体仍然是卵细胞，因为他认为卵细胞内含有促进基因分化的必不可少的物质。

接下来，他首先提取怀孕多赛特母羊(白脸)乳腺细胞中的细胞核，这些细胞核内包含有多利身上几乎所有的遗传信息，再将细胞核转移到苏格兰绵羊(黑脸)的去核卵细胞中，在微电流的刺激下，核与卵细胞融合为重建细胞。先将277个重建细胞暂时植入母羊的输卵管中，只有29个成功发育为胚胎。最后再将这些胚胎植入13只母羊子宫内，历经148天的艰难孕育后，一个编号为6LL3的小绵羊呱呱坠地，体重6.6千克，白脸――和它的基因母亲一样。

这一天是1996年7月5日，世界上首只体细胞克隆哺乳动物诞生；彼时威尔穆特可能不在现场，但他拥有和多利最著名的合影。虽然多利的世界第一头衔拥有众多限定词，但威尔穆特明白其轰动性，技术和社会的互动史表明：当繁殖方式离人类天性越远，克隆对象离人类越近时，公众的兴趣则会越高，更何况羊只拥有比人类更大的大脑比例。论文中威尔穆特成了第一作者，这意味着他将是“多利之父”――虽然直到十年后，他才承认克隆羊的大部分功劳应该归于坎贝尔。

“多利”号克隆飓风

研究员知道它必将成为大明星，所以给它起名为多利，同名女歌手不仅名声显赫，而且胸部巨大，这也正是研究员对多利的另一个期望……和多利同期出生的还有另外7个兄弟，可是从来没有人听说过它的名字，因为它的基因都来自胚胎细胞核。

1997年2月，威尔穆特在《自然》杂志上刊登论文的同时，也将多利介绍给了广大公众。多利掀起的克隆旋风，甚至比威尔穆特的预估更强大、更持久，即使是《自然》杂志的最大对手――美国的《科学》杂志也不得不将多利的诞生评为年度最佳科技成果。随后，医药大厂、野生动物保护者和疑难杂症患者也都从中看到了希望，尽管多利克隆技术的成功率低到让人起疑。

核转移克隆技术仿佛空降人间，犹如重磅炸弹，激起了人对生殖前景的担忧。既然羊只可以无性克隆，人类岂非也可以孤雌生子?伦理学的担忧固然有着前景考虑，但人似乎忘记了一些基本事实：多利既不是首只克隆羊，也不是首只克隆哺乳动物，更不是首只克隆动物。只不过，以前的克隆技术都是从胚胎细胞中获取细胞核，而如今却改为取之不尽的体细胞，此时的公众不免有了“孙悟空拔毛化身”的紧张。随后，这种紧张情绪开始蔓延，以致于在1997年底，世界卫生组织一度要求禁止人类克隆。

正当科学家忙于验证、公众热衷于激辩之时，多利则在苏格兰的室内羊圈中接受膜拜。女王般的(事实上，多利的确曾当选苏格兰反君主主义者心中最受欢迎的女王)生活固然尊贵，但却没有自由。所幸的是，多利两岁时，与一只威尔士山羊“喜结连理”，“新郎”名叫戴维，不久“爱情结晶”邦尼出世，次年再产三子。多利终于不负期望，以行动证明了名字的正确性。

这两年是多利最幸福的年份，它以常规的婚配，回应了人对克隆动物的种种担忧。此时的科学研究也有了很大进展：山羊、猪等动物相继克隆成功。核转移克隆技术正沿着乐观主义所设定的路线高歌猛进。直到2001年科学家又成功克隆了濒危的印度野牛，可惜不久在产后感染中死去……

接下来的两年时间里，克隆技术持续成为科技记者的追逐热点。“疯狂”的科学家和组织敏锐地洞察到这一热点，相继宣布克隆人计划，但这一计划最终引起了国际政治界的激烈反弹，法国和德国甚至建议联合国签署禁止繁殖性克隆人的条约(后被放弃)。

然而，政治的吸引力显然不如多利的光环耀眼，2001年度最让人牵肠挂肚的莫过于多利罹患关节炎的消息，因为对于正处于青年期的多利来说，患上典型的老年疾病，可不是什么好迹象。人对多利早衰的担心终于在分子生物学上有了明证，多利的染色体端粒比正常绵羊短20％，而端粒和细胞寿命密切相关。后来，另一项老年性疾病“进行性肺炎”开始袭击多利，为了避免遭受更大的痛苦，研究所决定对多利实施安乐死。这一年是公元2003年，多利享年6岁，寿命仅为正常绵羊寿命的一半。同年，英国PPL公司也陷入困境。

反思与重生

“沉舟侧畔千帆过”。多利和PPL的衰退，是对克隆技术的沉重打击，但利好消息仍然不断。2003年，克隆马、鹿和骡相继诞生，美国FDA也表示克隆动物的肉奶是安全的。在汹涌澎湃的克隆浪潮中，人似乎有些迷失方向，成体动物的克隆仍是最吸引眼球的领域，但人也将太多的精力和金钱花费于此。

无形中，科学家自己圈就了核转移克隆技术的伦理困境。体细胞克隆虽然规避了胚胎供核的伦理问题，但科学家却误入歧途，将精力倾注于繁殖动物成体。多利所掀起的轩然大波清楚地说明，成体动物克隆正是人最大的忧心所在。

缅怀多利的低落情绪，很快被对克隆技术的反思所取代。克隆动物成体所形成的伦理学困境呼之欲出；早衰、非完美复制、低成功率的技术短板以及大量花费之后显现的黯淡前景……，这一切让很多人丧失了对核转移克隆技术的耐心，逐渐将关注的目光转向干细胞技术。

细胞技术论文篇13

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,是危害妇女身体健康的第二大肿瘤,预防宫颈癌可以通过早期筛查和早期干预来实现。在过去的50多年中,巴氏涂片细胞学检查应用于宫颈癌的筛查,明显降低了宫颈癌的发病率和死亡率,但由于传统巴氏涂片技术上的缺陷使其假阴性率高达15%-40%,因此,选择一种更加科学高效的检查手段替代传统的巴氏细胞学方法势在必行。液基薄层细胞制片技术(LCT)克服了传统巴氏涂片技术上的缺陷,使宫颈病变检出率显著提高,从而使宫颈癌患者达到早期发现、早期治疗的目的。

1　资料与方法

1.1　临床资料2008年1月-2010年6月期间我院妇科门诊和住院患者以及体检人群、中山大学附属第二医院妇科细胞病理室部分体检人员,年龄17-76岁,平均年龄32.6岁。门诊及住院患者宫颈疾病包括慢性宫颈炎、宫颈糜烂、宫颈赘生物、不规则阴道流血等。所有受检者均无急性阴道炎和子宫颈手术史。

1.2　方法

1.2.1标本收集受检者取膀胱截石位,暴露宫颈,用棉球轻拭子宫颈表面过多的分泌物,再用特制的宫颈刷插入宫颈管内绕子宫颈顺时针方向旋转5圈,收集宫颈口和宫颈管的脱落上皮细胞,将收集的脱落细胞及刷头一并保存在装有专用保存液的小瓶中。

1.2.2　标本处理收集的标本经涡旋震荡使采集器上的细胞进入瓶内液体中,经过2次梯度离心后,弃去废液,将浓缩的细胞成分转移到自动制片机上操作,细胞经自然沉淀转移到涂有粘附剂的载玻片上制成直径为13 mm超薄层细胞涂片,在全自动制片过程中同时完成细胞染色,封片后镜检。

1.2.3　细胞学诊断按照2001年修订的TBS系统进行诊断。涂片质量分为满意和不满意,涂片中的鳞状细胞5000-8000个,且清晰可见,并至少包括10个保存完好的宫颈管细胞或鳞状化生细胞为满意,不符合上述条件为不满意。满意的涂片结果分为阴性和阳性,阴性诊断结论:未见上皮内病变或恶性病变(negative for intraepithelial lesion malig-nancy,NILM),包括正常结果及良性反应性改变。阳性诊断结论包括:(1)非典型鳞状上皮细胞,意义不明确(atypical squamous cells of undeterminedsignificance,ASC―US);(2)非典型鳞状上皮细胞,不除外高级别鳞状上皮内病变(atypical squaraouscells,cannot exclude high―grade squamous intraepi―theliallesion,ASC―H);(3)低级别鳞状上皮内病变(low―grade squamous intraepithelial lesion,LSIL);(4)高级别鳞状上皮内病变(high―gradesquamous intraepithelial lesion,HSIL);(5)鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC);(6)非典型腺细胞(atypical glandular ceUs,AGC);(7)腺癌(adeno-carcinoma,AC)。另外,根据TBS分级系统,LSIL包括人瘤病毒(HPV)感染和CIN I;HSIL包括CINII和CIN |||。

2　结果

2.1　细胞学结果筛查16698例宫颈细胞学病例中,细胞学结果为阴性的有15365例,占92.07%;阳性的有1276例,占7.64%。具体判读结果见表1。

2.2　阳性结果病例年龄分布情况见表2。